Если вы не знаете с чего начать или вы начали, но у вас всё как-то плохо с результатами измерений азота методом Кьельдаля, попробуйте БЕЗ ИЗМЕНЕНИЙ И ДОПУЩЕНИЙ следующий “over-kill” режим:
МИНЕРАЛИЗАЦИЯ:
— масса навески сухой пробы — 0,2 г, жидкой — 1,0 г.
— последовательный режим нагрева: 100 ℃ — 20 мин, 200 ℃ — 10 мин, 400 ℃ — 90 мин.
— схема исследования:
а) 2 холостые пробы (только кислота + катализатор)
б) 2 положительные пробы (триптофан или сертифицированный СО массовой доли белка)
в) в остальные пробирки по 2 навески каждой анализируемой пробы (гомогенизированные, смешанные и точно взвешенные)
Пробирки с пробами желательно располагать в минерализаторе бессистемно (случайно), для исключения влияния локальных перегревов / недогревов в приборе.
— в каждую пробирку добавляется по:
а) 15 мл концентрированной серной кислоты;
б) 1 таблетке катализатора (5,0 г K2SO4 + 0,5 г CuSO4 * 5H2O (у нас это KjelReference Missouri 9L) или 3,5 г K2SO4 + 0,4 г CuSO4 * 5H2O (у нас это KjelReference Missouri 10M));
в) желательно — центры кипения (прокаленные и / или промытые в кислоте куски фарфора, корунда или стеклянные шарики);
— состав среды для скруббера (абсорбера газов): первая ступень — р-р 30 % (масс/масс) натрия гидроксида, вторая — вода.
— после окончания минерализации, пробирки на штативе снимаются для охлаждения на воздухе и ровно через 30 мин заливаются водой по 50 мл для исключения выпадения осадка и кристаллизации.
Минерализованные пробы могут быть любого цвета, но не должны иметь коричневого / желтого оттенка. Холостые пробы будут ярко-зеленого цвета.
ДИСТИЛЛЯЦИЯ
— в приемную колбу добавить:
а) 40 мл р-ра 40 г/л борной кислоты объемом;
б) 10 капель смешанного индикатора, который готовится из 3 (трех) объемов 0,1 % р-ра бромкрезолового зеленого (предварительное растворение в спирте) и 1 (одного) объема 0,2 % р-ра метилового красного (предварительное растворение в ацетоне).
Цвет смеси должен стать ярко малиновым. Если он не такой, а серый или зеленый — плохо отмыта посуда.
— режим дистилляции:
а) объем воды дополнительного разбавления: 100 мл;
б) объем добавляемой р-ра натриевой щелочи (40 % (масс/масс)): 50 мл;
в) время дистилляции: 12 мин.
После начала дистилляции содержимое колбы для минерализации должно окраситься в голубой — синий цвет, что свидетельствует о взаимодействии щёлочи с солью меди. Если этого не происходит, то в системе избыток кислоты и вся щёлочь израсходована на взаимодействие с ней, необходимо увеличить объём добавляемой щёлочи. Также в процессе дистилляции, при достижении определённой температуры, наблюдается переход окраски из синей в чёрную, что свидетельствует о термическом разложении ранее образованного гидроксида меди.
В процессе дистилляции нужно замерить температуру дистиллята — она должна быть не более 30 ℃, а вообще ниже 20 ℃. Если выше — следует подключить холодильник к водопроводной воде, либо, если уже так сделано — найти причину неэффективности конденсации.
Перед самым окончанием дистилляции проверить стоки лакмусовой бумагой — цвет не должен измениться. Если бумага приняла зелёную-синюю окраску (щелочная среда) — необходимо увеличить время дистилляции.
По окончании дистилляции р-р в приемной колбе должен в любом случае изменить свой цвет, даже для холостой пробы, хотя бы на серый.
Убедиться, что все реагенты добавлены в достаточных количествах можно посредством титрования положительного контроля, где содержание азота заранее известно. Ели получаются заниженные результаты, а ошибки в приготовлении растворов отсутствуют — необходимо увеличить объём добавляемой щёлочи.
ТИТРОВАНИЕ
Титрование производится 0,1 Н раствором соляной кислоты.
Установка концентрации кислоты производится по предварительно высушенному карбонату натрия.
Количество кислоты, пошедшее на титрование холостой пробы должно быть не более 0,2 мл. Для подтверждения таких малых значений лучше использовать микробюретки на 1 мл. Если израсходовано большее количество титранта (особенно, если сильно больше) — следует искать контаминированный реагент (серная кислота, катализаторы, вода, щелочь).
P.S. Описанный подход является “over-kill” методом, т.е. может быть избыточен во всех своих параметрах, но позволяет воспроизвести метод без ошибок, связанных с оператором. При удовлетворительных стабильных результатах, данный метод может быть оптимизирован как по режимам, так и по расходам реагентов, опираясь на уже полученные удовлетворительные результаты “over-kill” метода.
